Leishmaniasis is a parasitic infection caused by Leishmania species in tropical and subtropical regions. Cyprus, located in the Eastern Mediterranean basin, is considered endemic for leishmaniasis. In our study, we aimed to investigate the origins of two Leishmania strains isolated from Turkish Republic of Northern Cyprus by sequencing and to establish in vivo animal models by examining the clinical reflections of these strains in mice. A biopsy material was taken from a seven-year-old girl with a lupoid lesion on her forehead and amastigotes were detected in the smears. Following culture of the specimen on enriched NNN media and detection of promastigotes, the patient was diagnosed with cutaneous leishmaniasis (CL) (no: 504). A four-year-old boxer dog was taken to a veterinary clinic with complaints of weight loss, weakness, hair loss and lymphadenopathy. A blood sample was taken from the dog, cultured in enriched NNN media and canine leishmaniasis (CanL) was diagnosed with the growth of promastigotes (no: 753). Leishmania promastigotes obtained from CL and CanL cases were cryopreserved and stored in the Parasite Bank, Manisa Celal Bayar University. When the isolates were to be used, they were transferred to RPMI-1640 medium and grown to the concentration of 107 promastigotes/mL required for the study. The isolates were identified to the species level using primers specific for ITS-1 and cpb E/F regions of Leishmania. A phylogenetic tree was constructed according to the data obtained from the sequence analysis. In addition to the Northern Cyprus Leishmania isolates for in vivo studies, one each of Leishmania donovani (MLd) and Leishmania tropica (MLt) isolates from Manisa were included for comparison. Eight study groups and two control groups (uninfected) were formed with five Mus musculus (Balb/c) mice in each group (total 10 groups and 50 Balb/c mice). Four mouse study groups were separately used with MLt, 753, MLd and 504 strains to establish the CL animal model. The other four mice groups were used for the VL animal model with the same strains. In addition, one group each for the CL and VL models was used as a negative control group. Mice in the CL groups were infected with 100 µL of the prepared promastigote suspension on the sole of the right foot intradermally and the width and height of the sole of the foot were measured weekly for six weeks. Mice in VL groups were infected with 100 µL promastigote suspension intraperitoneally and VL symptoms were monitored. Thirty days after the injection, the spleen and liver were removed by autopsy and their sizes were measured. In our study, one of the two Northern Cyprus Leishmania isolates molecularly characterised was Leishmania donovani (human strain, no: 504) and the other was Leishmania tropica (canine strain, no: 753). Mice in the CL and VL groups developed symptoms of CL and VL, respectively, and both Manisa and Northern Cyprus isolates had similar reflections in mice. In the literature, it is reported that Leishmania infantum is the causative agent of CanL cases in Northern Cyprus. However, according to our study, L.tropica may also be the source of CanL infections in the island. In addition, it was observed that Northern Cyprus isolates caused both CL and VL infections in mice and it was concluded that they can be used in future in vivo studies.
Layşmanyazis, tropikal ve subtropikal bölgelerde Leishmania türlerinin neden olduğu parazitik bir enfeksiyondur. Doğu Akdeniz havzasında yer alan Kıbrıs, layşmanyazis için endemik kabul edilmektedir. Bu çalışmada, Kuzey Kıbrıs Türk Cumhuriyeti’nde izole edilen iki Leishmania suşunun sekanslanarak kökenlerinin araştırılması ayrıca bu suşların farelerdeki klinik yansımaları incelenerek in vivo hayvan modellerinin oluşturulması amaçlanmıştır. Alnında lupoid lezyonu olan yedi yaşındaki bir kız hastadan biyopsi örneği alınmış ve yayma preparatlarında amastigotlar tespit edilmiştir. Örneğin zenginleştirilmiş NNN besiyerinde yapılan kültürü sonucu promastigotların saptanmasını takiben hastaya kutanöz layşmanyazis (KL) tanısı koyulmuştur (no: 504). Dört yaşında boxer cinsi bir bekçi köpeği, kilo kaybı, halsizlik, tüy dökülmesi ve lenfadenopati şikayetleriyle bir veteriner kliniğine götürülmüştür. Kanin layşmanyazis (KanL) semptomları bulunan köpekten kan örneği alınmıştır. Kan örneğinin zenginleştirilmiş NNN besiyerinde kültürü yapılmış ve promastigotların üremesiyle KanL teşhisi konulmuştur (no: 753). KL ve KanL olgularından elde edilen Leishmania promastigotları kriyoprezerve edilmiş ve Manisa Celal Bayar Üniversitesi, Tıbbi Parazitoloji Laboratuvarı Parazit Bankasında saklanmıştır. İzolatlar kullanılacakları zaman RPMI-1640 besiyerine aktarılmış, çalışma için gerekli olan 107 promastigot/mL konsantrasyonuna kadar çoğaltılmıştır. Üreyen izolatlardan, Leishmania’nın ITS-1 ve cpb E/F bölgelerine özgü primerler kullanılarak tür tayinleri yapılmıştır. Tür tanımlaması yapılan Kuzey Kıbrıs izolatlarının dizi analizlerinden elde edilen verilere göre bir filogenetik ağaç oluşturulmuştur. In vivo çalışmalar için Kuzey Kıbrıs Leishmania izolatlarına ek olarak, karşılaştırma yapılması amacıyla, Manisa’dan izole edilen birer tane Leishmania donovani (MLd) ve Leishmania tropica (MLt) izolatı çalışmaya dahil edilmiştir. Her grupta beş adet Mus musculus (Balb/c) fare olacak şekilde sekiz çalışma grubu ve iki kontrol grubu (enfekte olmamış) (toplam 10 grup ve 50 Balb/c fare) oluşturulmuştur. KL hayvan modeli için MLt, 753, MLd ve 504 suşlarıyla ayrı ayrı dört fare çalışma grubu kullanılmıştır. Diğer dört fare grubu ise aynı suşlarla VL hayvan modeli için ayrılmıştır. Ayrıca, KL ve VL modelleri için birer grup negatif kontrol grubu olarak belirlenmiştir. KL gruplarındaki fareler, hazırlanan promastigot süspansiyonundan 100 µL ile sağ ayak tabanına intradermal yolla enfekte edilmiş ve farelerin ayak tabanı genişliği ve yüksekliği altı hafta boyunca her hafta olacak şekilde ölçülmüştür. VL gruplarındaki farelere ise 100 µL promastigot süspansiyonu intraperitoneal yolla peritondan verilmiş ve farelerdeki VL semptomları takip edilmiştir. Enjeksiyondan 30 gün sonra otopsi yapılarak dalak ve karaciğerleri çıkartılıp boyutları ölçülmüştür. Çalışmada, moleküler olarak karakterize edilen iki Leishmania izolatından biri L.donovani (insan suşu, no: 504), diğeri ise L.tropica (köpek suşu, no: 753) idi. KL ve VL gruplarında bulunan farelerde sırasıyla KL ve VL semptomlarının geliştiği ve hem Manisa hem de Kuzey Kıbrıs izolatlarının hayvan modellerindeki yansımalarının benzer olduğu tepit edilmiştir. Literatürde, Kuzey Kıbrıs’taki KanL olgularına Leishmania infantum’un neden olduğu belirtilmektedir. Fakat çalışmadan elde edilen veriler doğrultusunda, farklı olarak, L.tropica’nın da adadaki KanL enfeksiyonlarının kaynağı olabileceği düşünülmektedir. Ayrıca, Kuzey Kıbrıs izolatlarının, farelerde hem KL hem de VL enfeksiyonlarına neden olduğu görülmüş ve ileride yapılacak olan in vivo çalışmalarda kullanılabileceği kanısına varılmıştır.
