Günümüzde gelişen yeni teknolojiler sayesinde sinir sistemi hastalıklarının hücresel tedavisinde kök hücrelerinin önemi sonyıllardaki çalışmalar ile desteklenmektedir. O nedenle kök hücrelerden nöronal hücrelerin farklılaştırılması protokollerinin oluşturulmasıbüyük önem taşımaktadır. Çalışmamızda, fare embriyonik kök (EK) hücre hattından, nöron ve nöroglial hücrelerin farklılaştırılması venöronal hücre belirteçleri ile analizi amaçlanmıştır. Fare EK hücreler, fibronektin kaplı petrilerde kültür ortamına N2 ve bFGF ilavesiile nörojenik seri hücrelerine farklılaştırıldı. Farklılaşmış hücrelerin tanımlanması için hücreler, immünohistokimya tekniği kullanılarakışık mikroskobu ile ve elektron mikroskobu ile değerlendirildi. İndirek immünohistokimyasal boyama yöntemi SSEA-1 (fare ES hücrebelirteci), Nestin (nöron öncülü hücre belirteci), βIII-Tubulin (nöron hücre belirteci), MAP-2 (nöron hücre belirteci), GFAP (astrosit belirteci)ve O4 (oligodendrosit belirteci) için uygulandı. Hücrelerin farklılaşmasının 1. haftasından sonra SSEA-1 ve Nestin immünoreaktivitesisırasıyla negatif ve orta saptandı. Kültürün 2. haftasından sonra farklılaşmanın hala devam etmesi ve özellikle β-III Tubulin ve MAP-2immünoreaktivitesinin güçlü pozitif ve O4 ve GFAP immünoreaktivitesinin zayıf olması nöronal farklılaşmayı desteklemiştir. Sonuçolarak, bizim sonuçlarımız göstermiştir ki fare EK hücrelerinden kaynaklanmış nöronal hücreler, N2+bFGF+fibronektin kullanılan kültürkoşullarında özellikle nörona farklılaşmıştırlar. Bu nedenle, farklılaştırılmış bu hücreler dejeneratif sinir sistemi hastalıklarının hücreseltedavisinde kullanılabilir.
With new technologies emerging today, the importance of stem cells in the cell therapy of nervous system diseases is supportedby recent studies. Therefore, the development of neuronal cell diferentiation protocols from stem cells is of great importance. Inour study, the diferentiation of neuronal and neuroglial cells from mouse embryonic stem (ES) cell line and their analysis withneuronal cell markers are aimed. Mouse ES cells were diferentiated to neurogenic series cells by adding N2 and bFGF to the culturemedium on coated Fibronectin dishes. For the identification of diferentiated cells, they were evaluated by light microscopy usingimmunhistochemistry techniques and by electron microscopy. Indirect immunohistochemical staining method was performedwith SSEA-1 (mouse embriyonic stem cells marker), Nestin (neural precursor cells marker), βIII-Tubulin (neuronal cells marker),MAP-2 (neuronal cells marker), GFAP (astrocyte marker), and O4 (oligodendrocyte marker). After 1 week of diferentiation of cells,immunoreactivities of SSEA-1 and Nestin were detected to be negative and moderate, respectively. After 2 weeks culture time, thediferentiation was still continuing and especially positive immunoreactivities of β-III Tubulin and MAP-2 and weak immunoreactivitiesof O4 and GFAP were supported neuronal diferentiation. In conclusion, our results suggest that neuronal cell derived from mouse EScells were diferentiated particularly to neuron using N2+bFGF+fibronectin culture condition. Therefore, these diferentiated cells maybe used as a treatment method in degenerative diseases of the nervous system.
